Performance of an In-house Multiplex PCR and Comparison of Amplicor HIV-1 Test For Diagnosis of HIV-1 Infection in Thailand - การเปรียบเทียบประสิทธิภาพการตรวจวินิจฉัยการติดเชื้อเอชไอวี- 1 วิธีพีซีอาร์ระหว่างชุดน้ำยาผลิตใช้เองชนิด Multiplex PCR กับชุดน้ำยาสำเร็จรูป Amplicor HIV-1 Test

Abstract

Abstract

          This study compared laboratory performance of an in-house HIV-1 DNA-PCR to an Amplicor HIV-1 test in the detection of HIV-1 DNA in 255 blood specimens from 35 infant born to HIV infected mothers, 40 individuals at risk undergoing HIV testing and 180 blood donors. The specimens were collected during December 2003 - July 2004. The in-house multiplex PCR simultanously detected both HIV-1 DNA and human DNA at chromosome 5. The latter PCR product was used as a marker indicating the quality of blood specimens for PCR testing. This in-house multiplex PCR has limit of detection of 5 copies 8E5 per reaction with 100 percent detection [95% confidence interval (CI); 78.2-100]. Both PCR gave 100 percent concordant results, as compared to HIV-infection status of 255 samples (chi-square test, p= 1.00).

           The in-house multiplex PCR has comparable sensitivity and specificity to the Amplicor HIV-1 test in detecting HIV infection status.

           The test has been implemented to support HIV-1 diagnostic services in Thailand for 8,000-12,000 under-18-month infants born to infected mothers and further field assessment should be carried out in order to verify the effectiveness of the test.

Key words: HIV-1, DNA-PCR, Amplicor HIV-1 test, in-house multiplex DNA-PCR

บทคัดย่อ

          ระหว่างเดือนธันวาคม ๒๕๔๖ ถึงกรกฎาคม ๒๕๔๗ คณะผู้วิจัยได้รวบรวมตัวอย่างเลือด ๒๕๕ ตัวอย่างเป็นตัวอย่างติดเชื้อเอชไอวี ๒๑ ตัวอย่าง ไม่ติดเชื้อเอชไอวี ๒๓๔ ตัวอย่าง โดยเก็บจากทารกที่คลอดจา มารดาที่ติดเชื้อเอชไอวี ๓๕ ราย บุคคลผู้มีปัจจัยเสี่ยงขอรับการตรวจการติดเชื้อเอชไอวี ๔๐ ราย และผู้บริจาคเลือด ๑๘๐ ราย เพื่อเปรียบเทียบประสิทธิภาพการตรวจหาเชื้อเอชไอวี ระดับห้องปฏิบัติการด้วยชุดน้ำยา In-house Multiplex PCR กับชุดน้ำยาสำเร็จรูป Amplicor HIV-1 test พบว่าชุดน้ำยา In-house Multiplex PCR มีความไวในการตรวจร้อยละ ๑๐๐ ช่วงความเชื่อมั่นร้อยละ ๙๕ อยู่ระหว่าง ๗๘.๒๐-๑๐๐ เมื่อเทียบกับเซลล์มาตรฐาน 85 ได้ต่ำสุด ๕ ชุดต่อปฏิกิริยา และยังตรวจหาดีเอ็นเอของเชื้อเอชไอวี-1 พร้อมกับตรวจหาชิ้นส่วนดีเอ็นเอของมนุษย์บนโครโมโซมคู่ที่ ๕ ซึ่งใช้ระบุคุณภาพตัวอย่างดีเอ็นเอได้ ชุดน้ำยาทั้งสองให้ผลตรวจตรงกันทั้ง ๒๕๕ ตัวอย่าง (chi-square test, p = 1.00) และตรงกับสถานะ การติดเชื้อเอชไอวี ซึ่งตรวจด้วยวิธีมาตรฐาน ดังนั้นการศึกษาระดับห้องปฏิบัติการครั้งนี้แสดงว่าชุดน้ำยาที่ผลิต ใช้เองมีประสิทธิภาพเท่ากับชุดน้ำยาสำเร็จรูปจากต่างประเทศซึ่งมีราคาแพงกว่าถึง ๑๐ เท่าตัว

          ปัจจุบันได้ใช้ชุดน้ำยา In-house Multiplex PCR ให้บริการตรวจขั้นพื้นฐานของกระทรวงสาธารณสุข ซึ่งครอบคลุมเด็กอายุต่ำกว่า ๑๘ เดือน ที่คลอดจากมารดาที่ติดเชื้อเอชไอวี จำนวน ๘,๐๐๐-๑๒,๐๐๐ คน จำเป็นต้องมีการศึกษาประสิทธิภาพของชุดน้ำยาในภาคสนาม เพื่อตรวจสอบประสิทธิภาพการใช้งานที่แท้จริงต่อไป

คำสำคัญ: ไวรัสเอชไอวี-1, วิธีเพิ่มปริมาณสารพันธุกรรม, ชุดน้ำยาสำเร็จรูป, ชุดน้ำยาที่ผลิตขึ้นใช้เอง